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• 免费试用产品申领规范：

1.   申领对象：欢迎申领健吉跃的免费试用产品。健吉跃所有产品，包括免费试用产品，仅限于专业人员的科学研究用，非专业人员不得申领。

2.   使用范围：健吉跃所有产品，包括免费试用产品，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

3.  申领个数：免费试用产品仅限于试用的目的，对于任何一种免费试用产品，只能申领1个，但可以同时申领多种免费试用产品。

4.  申领次数：免费试用产品仅限于试用的目的，每个实验室对于相同的免费试用产品仅限申领一次。

5.  运费：如果单独申领免费试用产品，运费由申领人承担。如果在订购产品时申领，运费和所订购产品合并计算。

• 质量保证与免责声明：

1.   我们保证向用户提供完全合格的产品。如您认为产品确实存在质量问题，请在收到产品7个工作日内并且产品使用量没有超过一半前以书面方式发送电子邮件至jjy@jianjiyue.cn，否则将不予受理或赔偿。同时产品赔偿只限于产品价值本身，不涉及其他任何损失。如果您的样品非常珍贵，请务必先使用适当的阳性对照进行检测，在检测体系建立起来以后，再检测您珍贵的样品。

2.  若因用户贮存或使用不当所引起的质量投诉，我们不予承担责任。除质量原因外的其它任何问题，例如缺乏使用某种试剂盒所需的仪器，订购错了试剂盒等，我们不承担任何责任，也不接受非质量原因引起的客户投诉。

3.  如发现产品有任何缺漏或破损，请在收到产品后2个工作日内通知我们。

4.  我们提供的所有产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。如有单位或个人擅自改变我们产品的用途，或存放于不适当的地方，我们不承担任何责任。

质粒小提试剂盒

（离心柱型）

货号：DP001         规格：100T/200T      保存：室温（RNase A -20℃保存）

产品说明：

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性结合溶液中DNA的原理特异性提取质粒DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一的吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

产品组成：

储存条件：

该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月。RNase A -20℃长期保存，2-8℃可稳定保存。若溶液产生沉淀，可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。单独包装的RNase A -20℃稳定保存12个月以上。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤：

1. 取1-5mL细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液Ⅰ（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3. 向离心管中加入250μL溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和，以免打断细菌基因组DNA进而造成污染，此时菌液应变得清亮黏稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。

4. 向离心管中加入350μL溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

5. 将上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室温放置2min，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入700μL漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放回收集管。

8. 12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温放置数分钟，目的是去除吸附柱中残余的漂洗液，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验，如酶切、PCR等。

9. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置2min，12000rpm离心1min。

10. 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心1min。提取获得的质粒DNA经浓度及纯度检测后于-20℃保存。

注意事项（在使用本试剂盒前请阅读此注意事项）：

1. 使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可经37℃水浴，待溶液恢复澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用时避免直接接触，后应立即拧紧盖子。

2. 洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右（可用NaOH将水的pH值调至此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率，提取产物应保存在-20℃，以防降解。

3. 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10mL过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当地延长时间，以增加提取效率。

4. 浓度及纯度检测：得到的质粒DNA纯度可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计进行检测，其与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。

DP001-02-03 质粒小提试剂盒.docx