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One Step RT-qPCR Kit (Probe)

1280

货号:  ER101-02

单位:  袋

品牌:  三狮

规      格: 

100T

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账号:61050110309100000096

 

  • 免费试用产品申领规范:

1.   申领对象:欢迎申领健吉跃的免费试用产品。健吉跃所有产品,包括免费试用产品,仅限于专业人员的科学研究用,非专业人员不得申领。

2.   使用范围:健吉跃所有产品,包括免费试用产品,仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

3.  申领个数:免费试用产品仅限于试用的目的,对于任何一种免费试用产品,只能申领1个,但可以同时申领多种免费试用产品。

4.  申领次数:免费试用产品仅限于试用的目的,每个实验室对于相同的免费试用产品仅限申领一次。

5.  运费:如果单独申领免费试用产品,运费由申领人承担。如果在订购产品时申领,运费和所订购产品合并计算。

 

  • 质量保证与免责声明:

1.   我们保证向用户提供完全合格的产品。如您认为产品确实存在质量问题,请在收到产品7个工作日内并且产品使用量没有超过一半前以书面方式发送电子邮件至jjy@jianjiyue.cn,否则将不予受理或赔偿。同时产品赔偿只限于产品价值本身,不涉及其他任何损失。如果您的样品非常珍贵,请务必先使用适当的阳性对照进行检测,在检测体系建立起来以后,再检测您珍贵的样品。

2.  若因用户贮存或使用不当所引起的质量投诉,我们不予承担责任。除质量原因外的其它任何问题,例如缺乏使用某种试剂盒所需的仪器,订购错了试剂盒等,我们不承担任何责任,也不接受非质量原因引起的客户投诉。

3.  如发现产品有任何缺漏或破损,请在收到产品后2个工作日内通知我们。

4.  我们提供的所有产品仅限于专业人员的科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。如有单位或个人擅自改变我们产品的用途,或存放于不适当的地方,我们不承担任何责任。

产品概述

One Step RT-qPCR Kit (Probe)

货号:ER101               规格:50T/100T              保存:-20℃保存

产品简介:

本品是采用探针法进行一步法反转录-实时荧光定量的专用试剂,使用本品进行One Step RT-qPCR反应可在同一反应管内连续进行,操作简单,避免了样品间交叉污染的同时也提高了检测的灵敏度。本试剂盒采用新型逆转录酶(HI-MMLV Reverse Transcriptase)、新型抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶及RNase InhibitorOne Step RT-qPCR Enzyme Mix形式,具有更强的RNA亲和性和热稳定性,以及更高的扩增效率和特异性,可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对多种高低丰度的靶基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。

产品组成:

image.png


储存条件:

-20℃条件下保存,有效期至少12个月。

质量控制:

本产品经质量检测,不含脱氧核糖核酸内切酶活性、脱氧核糖核酸外切酶活性和核糖核酸酶污染。宿主基因组残留低于10拷贝。

产品用途:

本试剂盒适用于探针一步法反转录-实时荧光定量PCR,可以准确、简单的进行RNA的表达分析,尤其适合微量RNA的检测,适用于各类荧光定量PCR仪。

注意:部分公司Real Time PCR扩增仪因孔间荧光信号存在误差,请自备或与厂家联系购置ROX Reference Dye,用以校正误差,详细情况请根据实验设计、仪器说明书或各荧光探针的具体使用要求进行选择。另外,本试剂盒不含gDNA(基因组DNA)去除组分,如实验要求无gDNA干扰,请在RNA提取过程中/提取后先自行进行gDNA去除步骤,再参照本试剂盒进行实验,避免影响您的实验结果。

产品特点

      纯净:反转录-荧光定量一管完成,避免交叉污染。
  灵敏:低浓度模板也能被准确识别。
  抗逆:具备较强抗干扰能力,适合不同模板。
  简便:优化产品组成,提高实验效率。


      产品用途

本试剂盒适用于探针一步法反转录-实时荧光定量PCR,可以准确简单的进行RNA的表达分析,尤其适合微量RNA的检测,适用于各类荧光定量PCR仪。


实验示例


              示例1 ER101样本线性检测结果
使用SANSHIBIO One Step RT-qPCR Kit (Probe) (ER101) ,对动物源性系列梯度稀释的样本进行扩增。实验结果表明,ER101具备良好的、稳定的扩增性能,8个样本梯度的扩增Ct值的线性系数> 0.99。

                   

                                                                          示例1 EH002系列稀释样本线性测试结果
使用SANSHIBIO One Step RT-qPCR Kit (Probe) (ER101),分别对动物源性系列的高、中、低浓度样本进行重复性扩增实验。实验结果表明,ER101具备良好的、稳定的扩增性能,同-样本浓度的扩增Ct值的变异系数CV < 3%。





操作步骤:

1. RNase-Free离心管中配制以下反应液:

image.png


注:反应体系中各成分的量可根据实际情况自行调整。

2. 下列条件进行One Step RT-qPCR反应:

image.png


3. 反应结束后确认Real Time PCR仪扩增曲线,对结果进行分析。

注意事项:

1. One Step RT-qPCR Enzyme Mix含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心,收集到反应管底部,并用移液枪轻轻吹吸,充分混匀后使用。反应液配制请使用RNase-Free枪头,EP管等,尽量避免污染。

2. 一般来说反应体系中引物终浓度为0.2µM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时,可以在0.1-1.0µM范围内调整引物浓度。探针浓度可以在50nM-250nM之间调整。qPCR灵度极高,建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果有很大的影响,推荐将模板稀释后(如稀释2-5µL样本)加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性。

3. 扩增产物长度请选择在80bp-200bp范内。对于具有复杂的二级结构和高GC区域的模板,将逆转录温度提高至55℃,有助于提高扩增效率和检测灵敏度。

4. 实际使用的Real Time PCR仪是否支持快速扩增循环,初次尝试请进行预实验确认。延伸时间请根据使用的Real Time PCR仪所需要的数据采集最短时间限制进行调整,使用ABI 7700ABI 7900时至少30s,在使用ABI 7000ABI 7300时至少31s,在使用ABI 7500时至少34s。如果使用ABI系列Real Time PCR仪时,在溶液配置时加入ROX Reference dye