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• 免费试用产品申领规范：

1.   申领对象：欢迎申领健吉跃的免费试用产品。健吉跃所有产品，包括免费试用产品，仅限于专业人员的科学研究用，非专业人员不得申领。

2.   使用范围：健吉跃所有产品，包括免费试用产品，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

3.  申领个数：免费试用产品仅限于试用的目的，对于任何一种免费试用产品，只能申领1个，但可以同时申领多种免费试用产品。

4.  申领次数：免费试用产品仅限于试用的目的，每个实验室对于相同的免费试用产品仅限申领一次。

5.  运费：如果单独申领免费试用产品，运费由申领人承担。如果在订购产品时申领，运费和所订购产品合并计算。

• 质量保证与免责声明：

1.   我们保证向用户提供完全合格的产品。如您认为产品确实存在质量问题，请在收到产品7个工作日内并且产品使用量没有超过一半前以书面方式发送电子邮件至jjy@jianjiyue.cn，否则将不予受理或赔偿。同时产品赔偿只限于产品价值本身，不涉及其他任何损失。如果您的样品非常珍贵，请务必先使用适当的阳性对照进行检测，在检测体系建立起来以后，再检测您珍贵的样品。

2.  若因用户贮存或使用不当所引起的质量投诉，我们不予承担责任。除质量原因外的其它任何问题，例如缺乏使用某种试剂盒所需的仪器，订购错了试剂盒等，我们不承担任何责任，也不接受非质量原因引起的客户投诉。

3.  如发现产品有任何缺漏或破损，请在收到产品后2个工作日内通知我们。

4.  我们提供的所有产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。如有单位或个人擅自改变我们产品的用途，或存放于不适当的地方，我们不承担任何责任。

鹦鹉喙羽病病毒（PBFDV）核酸检测试剂盒（PCR法）

货号：AP2209002             规格：100T                保存：-20℃保存

产品简介：

本试剂盒根据鹦鹉喙羽病病毒（Psittacine Beak and Feather Disease Virus，PBFDV）基因中的保守区设计引物，并对检测体系进行了针对性优化，可针对鸟类羽毛、血液、组织及口腔/泄殖腔拭子等样品中PBFDV的特异核酸片段进行PCR扩增，扩增产物可以直接进行琼脂糖凝胶电泳，以进行结果判定。

产品组成：

储存条件：

-20℃条件下保存，有效期至少12个月。

实验操作：

1. 样本制备（样本制备区）

请参照动物基因组DNA快速提取试剂盒（PCR分析用）说明书，或其他符合相关标准的核酸提取试剂盒/方法，对处理后的样本进行核酸提取。提取的样本核酸尽量及时进行检测，放置于冰盒中，否则于4℃或-20℃保存。

2. 配制反应体系（加样区）

2.1 按照样本数量（n+2，n为样本数，每次实验建议设置1个阳性对照，1个阴性对照）配制反应液，具体配制方法如下：分别吸取（（n+2）*7.5µL无酶无菌水+（n+2）*10µL PBFDV反应液+（n+2）*1µL PBFDV引物Mix）加入洁净离心管中，充分吹吸混匀，分装至0.2mL PCR管（离心管）中，每孔18µL（如样本过多，可提前预制，于2~8℃短暂保存，2小时内使用）。

2.2 向反应液中依次添加2μL无酶无菌水（阴性对照）、样本核酸和PBFDV阳性对照，盖好管盖，做好记录，反应总体积为20μL。充分混匀，离心30秒后进行PCR扩增实验。

3. PCR扩增（扩增及产物分析区）

95℃预变性5分钟；94℃变性45秒，55℃退火45秒，72℃延伸45秒，共35个循环；72℃延伸5分钟；4℃保存。扩增产物先放置于4℃（-20℃约5分钟）条件下充分冷却（15分钟）。

4. 琼脂糖凝胶电泳（以水平电泳琼脂糖凝胶制备为例）

4.1 根据制胶量及凝胶浓度（1%~1.5%），量取一定量的电泳缓冲液，倒入三角锥形瓶中。

注：制胶缓冲液和电泳缓冲液需一致。

4.2 准确称量琼脂糖，小心加入三角锥形瓶中。在锥形瓶的瓶口盖上牛皮纸或封口膜，置于微波炉中或电磁炉上加热溶解。加热至溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心晃动锥形瓶，如此重复数次，直至琼脂糖完全溶解。

注：琼脂糖溶解过程采用多次短暂沸腾的方法，避免溶液过热暴沸。保证琼脂糖充分完全溶解，以免造成电泳图像模糊不清。

4.3 充分溶解的琼脂糖稍冷却后，加入适量核酸染料，轻微充分摇匀（避免产生大量气泡）。

4.4 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3~5mm之间。

4.5 室温下待胶凝固（大约30分钟~1小时），小心拔出梳子，将凝胶置于事前加入电泳缓冲液的电泳槽中，保证电泳缓冲液没过凝胶。

4.6 取5μL DNA Marker以及10μL经瞬时离心冷却后的扩增产物，分别加入凝胶的各个点样孔中，所有样本点样完成后，静置2分钟后，接通电泳槽电源，根据实际情况设置电压（70~120V）及电泳时间（20-30分钟）。

5. 结果判定

5.1 PBFDV阳性对照在500bp左右出现扩增条带，且阴性对照无目标扩增条带，结果成立。

5.2 样本检测结果在500bp左右出现一条扩增主条带，表明待检样本中存在PBFDV核酸，则判定为PBFDV阳性。

5.3 样本检测结果无目标扩增条带，表明样本中未检出PBFDV核酸，则判定PBFDV阴性。

注：阴性不代表宿主未感染病毒，如样本质量不合格、病毒载量过低或核酸提取（检测）不成功亦会产生“阴性”结果。建议先进行禽类性别鉴定检测，如结果正常判读，核酸无问题后再进行PBFDV检测。如有其他疑问请及时与厂家技术人员联系。

注意事项：

1）为了防止污染，实验需要严格进行分区操作，分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成交叉污染。实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。

2）试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融。试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求进行操作。操作台、离心机及移液器等仪器应定期使用含氯消毒剂、消毒酒精、核酸污染清除剂或紫外灯进行消毒。

3）PCR反应结束后，切勿立即开盖，充分冷却后再开盖取样，最大程度避免气溶胶污染。本品仅供科学研究，不用于临床诊断等其他用途。

AP2209002-02 鹦鹉喙羽病病毒（PBFDV）核酸检测试剂盒（PCR法）100T.docx